微量丙二醛（MDA）測(cè)試盒

（比色法）

本試劑盒是在原MDA 試劑盒針對(duì)一些含量較少的樣本

（比如培養(yǎng)細(xì)胞及細(xì)胞上清）測(cè)試效果不是太好的的基礎(chǔ)上

改進(jìn)的一種更為靈敏、簡(jiǎn)便的測(cè)試方法。

一、測(cè)試原理：

過(guò)氧化脂質(zhì)降解產(chǎn)物中的丙二醛 （MDA）可與硫代巴

比妥酸（TBA）縮合，形成紅色產(chǎn)物,在 532nm 處有吸

收峰。因底物為硫代巴-比妥酸（Thibabituric Acid TBA）所

以此法稱 TBA 法。

二、測(cè)試所需儀器和試劑：

可見(jiàn)光分光光度計(jì)，可調(diào)到 95℃左右的恒溫水浴箱或

沸水浴鍋，離心機(jī),無(wú)水乙醇(分析純),冰醋酸(分析純)。

三、試劑盒組成與配制(50 管/24 樣 A003-2-1)：

試劑一：液體 10mL×1 瓶，4℃保存。

試劑二：液體 6mL×1 瓶，用時(shí)加 170mL 雙蒸水混勻，4℃

冷藏。（注意不要碰到皮膚上）。

試劑三：粉劑×1 支，用時(shí)將粉劑加到 32mL 雙蒸水中，加

熱到 90℃～100℃，充分溶解后再加冰醋酸 30mL，

混勻后冷卻至室溫，配好的試劑避光室溫保存。

（注：冰醋酸自備）

標(biāo)準(zhǔn)品：10nmol/mL 四乙氧基丙烷 5mL×1 瓶，4℃冷藏。

四、試劑盒組成與配制（100 管/48 樣 A003-2-2）：

試劑一：液體 20mL×1 瓶，4℃保存。

試劑二：液體 12mL×1 瓶，用時(shí)每瓶加 340mL 雙蒸水混

勻,4℃冷藏（注意不要碰到皮膚上）。

試劑三：粉劑×1 支，用時(shí)將粉劑加到 62mL 雙蒸水中，加

熱到 90℃～100℃，充分溶解后再加冰醋酸

60mL，混勻后冷卻至室溫，配好的試劑避光室溫

保存。（注：冰醋酸自備）

標(biāo)準(zhǔn)品：10nmol/mL 四乙氧基丙烷 5mL×1 瓶，4℃冷藏。

水浴（或用鍋開(kāi)蓋煮沸）40 分鐘，取出后流水冷卻， 532nm

處，1cm 光徑，雙蒸水調(diào)零，測(cè)各管吸光度值 A。

a* 表示所取的樣品量、標(biāo)準(zhǔn)品量、無(wú)水乙醇的量、試劑一的量，

四者均相等。例如樣品取 0.1mL 則標(biāo)準(zhǔn)品、無(wú)水乙醇、試劑

一也取 0.1mL，若樣品取 0.2mL 則標(biāo)準(zhǔn)品、無(wú)水乙醇及試劑

一也取 0.2mL。因吸光度與加樣量呈正比曲線，因而結(jié)果不

受影響。

** 對(duì)照管每個(gè)樣本都需要做。

2、參考取樣量：血清（漿）取 0.1～0.2mL。低密度脂蛋白懸

液取 0.1～0.2mL 。細(xì)胞懸液及細(xì)胞上清取

0.1～0.2mL。

3、規(guī)范操作方法標(biāo)準(zhǔn)管參考吸光度：當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)品取樣量為 0.1mL

時(shí)，則標(biāo)準(zhǔn)管吸光度減去空白管的吸光度為

0.065～0.070（1cm 光徑）。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)品取樣量為

0.2mL 時(shí)，則標(biāo)準(zhǔn)管吸光度減去空白管的吸光

度為 0.130～0.140（1cm 光徑）。

4、規(guī)范操作方法及簡(jiǎn)便操作方法中，若發(fā)現(xiàn)檢測(cè)樣本吸光度

太低，可以將水浴時(shí)間 40 分鐘延長(zhǎng)至 80 分鐘，但您的同

一課題中 MDA 的檢測(cè)都必須延長(zhǎng)至 80 分鐘，以免造成批

間差異。

六、簡(jiǎn)便操作方法：（如果樣本數(shù)量很多，您可以采用簡(jiǎn)便操作

方法。）

1、混合試劑的配制：

工作液Ⅰ的配制:試劑一:試劑二:試劑三= a*:3:1,用多少配

多少,配好后當(dāng)天測(cè)定；

工作液Ⅱ的配制:試劑一:試劑二: 50%冰醋酸= a*:3:1,用多

少配多少,配好后當(dāng)天測(cè)定。

注:a*表示與樣本的取樣量相同,單位為毫升(mL)

旋渦混勻器混勻，試管口用保鮮薄膜扎緊，用針頭刺一小

孔，95℃水浴（或用鍋開(kāi)蓋煮沸）40 分鐘，取出后流水冷卻，

532nm 處，1cm 光徑，雙蒸水調(diào)零，測(cè)各管吸光度值。

a* 表示所取的樣品量、標(biāo)準(zhǔn)品量、無(wú)水乙醇的量、試劑一

的量，四者均相等。例如樣品取 0.1mL 則標(biāo)準(zhǔn)品、無(wú)水

乙醇、試劑一也取 0.1mL，若樣品取 0.2mL 則標(biāo)準(zhǔn)品、

無(wú)水乙醇及試劑一也取 0.2mL。因吸光度與加樣量呈正

比曲線，因而結(jié)果不受影響。

** 對(duì)照管每個(gè)樣本都需要做。

注 1：以上規(guī)范操作法及簡(jiǎn)便操作法適用于人及各種動(dòng)植物

的樣本（包括血清、動(dòng)植物組織及體液、細(xì)胞及細(xì)胞

培養(yǎng)液等）。

注 2：規(guī)范操作方法及簡(jiǎn)便操作方法中，若發(fā)現(xiàn)檢測(cè)樣本吸

光度太低，可以將水浴時(shí)間 40 分鐘延長(zhǎng)至 80 分鐘，

但您的同一課題中 MDA 的檢測(cè)都必須延長(zhǎng)至 80 分

鐘，以免造成批間差異。

七、測(cè)定意義：

機(jī)體通過(guò)酶系統(tǒng)與非酶系統(tǒng)產(chǎn)生氧自由基，后者能攻擊

生物膜中的多不飽和脂肪酸（polyunsaturated fatty acid，

PUFA），引發(fā)脂質(zhì)過(guò)氧化作用，并因此形成脂質(zhì)過(guò)氧化物。

如：醛基（丙二醛 MDA）、酮基、羥基、羰基、氫過(guò)氧基或

內(nèi)過(guò)氧基，以及新的氧自由基等。脂質(zhì)過(guò)氧化作用不僅把活

性氧轉(zhuǎn)化成活性化學(xué)劑，即非自由基性的脂類分解產(chǎn)物，而

且通過(guò)鏈?zhǔn)交蜴準(zhǔn)街ф湻磻?yīng)，放大活性氧的作用。因此，初

始的一個(gè)活性氧能導(dǎo)致很多脂類分解產(chǎn)物的形成，這些分解

產(chǎn)物中，一些是無(wú)害的，另一些則能引起細(xì)胞代謝及功能障

礙，甚至死亡。氧自由基不但通過(guò)生物膜中多不飽和脂肪酸

（PUFA）的過(guò)氧化引起細(xì)胞損傷，而且還能通過(guò)脂氫過(guò)氧

化物的分解產(chǎn)物引起細(xì)胞損傷。因而測(cè)試 MDA 的量常常可

反映機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化的程度，間接地反映出細(xì)胞損傷的程

度。

MDA 的測(cè)定常常與 SOD 的測(cè)定相互配合，SOD 活力的

高低間接反應(yīng)了機(jī)體清除氧自由基的能力，而 MDA 的高低

又間接反應(yīng)了機(jī)體細(xì)胞受自由基攻擊的嚴(yán)重程度，通過(guò) SOD

與 MDA 的結(jié)果分析有助于醫(yī)學(xué)、生物學(xué)、藥理及工農(nóng)業(yè)生

產(chǎn)的發(fā)展。

八、注意點(diǎn)：

1、試管要干凈，尤其測(cè)微量樣品時(shí)更為重要。

2、配制試劑時(shí)要充分混勻。測(cè)試過(guò)程中管吸的試劑要

丟棄，加樣品或試劑時(shí)要垂直加，不要加在管壁上。95℃

水浴前要充分混勻。

3、水浴時(shí)間及溫度要固定。沒(méi)有水浴鍋的單位可用鋁鍋、

鋁盒、鋁盆等開(kāi)蓋煮沸即可。

4、高脂樣本操作時(shí)，離心沉淀一定要充分，否則影響吸光

度，造成結(jié)果不穩(wěn)定。這種情況可增加離心轉(zhuǎn)速（3000

轉(zhuǎn)/分以上）或者延長(zhǎng)離心時(shí)間使沉淀。

5、冬天若發(fā)現(xiàn)測(cè)試溶液呈霧狀可以輕輕放水浴箱稍稍加

溫，待溶液溶解呈透明狀態(tài)用移液器吸取放入比色杯

中，若仍然呈霧狀，則考慮為高脂血癥。

6、樣本取樣量：若您的樣量較多，取樣量可以加倍，抽提

過(guò)程中，雙蒸水、無(wú)水乙醇、氯仿均要加倍。若您的樣

本為貧血病人的血樣，則取樣量也要加倍，抽提過(guò)程中，

雙蒸水、無(wú)水乙醇、氯仿的量則不變。

7、95℃水浴時(shí)用帶蓋的試管，以免反應(yīng)液的蒸發(fā)。若

沒(méi)有帶蓋的試管可用冰箱保鮮膜蓋好，用橡皮筋扎好后

在保鮮膜上用針刺一小孔即可代替蓋子。

九、本試劑盒優(yōu)點(diǎn)：

1、本試劑盒中試劑均無(wú)刺激性氣味，對(duì)操作人員無(wú)任何毒

害。

2、快速準(zhǔn)確，操作簡(jiǎn)便，每小時(shí)可測(cè) 100 例以上樣本。

3、靈敏度高，血清或血漿樣品只需 0.1mL,或者更少。

4、再現(xiàn)性好，變異系數(shù) CV=2.0%，同一份標(biāo)本數(shù)次測(cè)試結(jié)

果相差極微。

5、呈色穩(wěn)定，呈色后半天內(nèi)測(cè)吸光度不變。

6、試劑穩(wěn)定，保質(zhì)期一年；試劑三配制后避光室溫保存至

少 3 個(gè)月（顏色變成咖啡色即不可使用）。

7、血清樣品放置 4℃，3～5 天內(nèi)測(cè)試結(jié)果不變。-70℃以下

可保存 3 個(gè)月至半年。

8、測(cè)試面廣，可測(cè)血清（漿）、各種組織勻漿，培養(yǎng)細(xì)胞等。

9、主要原料均為進(jìn)口，但價(jià)格適中。

10、不需昂貴與特殊儀器，只需恒溫水浴箱或者鋁鍋、鋁盆

開(kāi)蓋煮沸，及 721、722、751、752 分光光度計(jì)任一型

號(hào)均可。

11、不受氣溫等外界因素的影響。是目前國(guó)內(nèi)MDA

測(cè)試方法。

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